Batman và người trợ lý Robin phải đối phó với Mr. Freeze, một bác sĩ tài ba vì quá thương vợ nên muốn trả thù thành phố Gotham, biến nơi đã gián tiếp gây ra cái chết cho vợ (do không tài trợ kinh phí nghiên cứu và chữa trị bệnh cho vợ) vĩnh viễn ngập trong băng giá. Ngoài ra, hắn còn được sự giúp sức của Poison Ivy, một nhà thực vật học bị biến đổi DNA luôn muốn bảo vệ mọi cây cỏ trên toàn thế giới. Cùng lúc đó, Alfred, người quản gia trung thành của Batman mắc phải một căn bệnh hiểm nghèo mà chỉ có Mr. Freeze mới có cách chữa trị. Sự việc đã kéo cô cháu gái Barbara Wilson vào cuộc và trở thành một Batgirl để hỗ trợ Batman và Robin để ngăn chặn âm mưu của Mr. Freeze và cứu Alfred.